An adenovirus vector containing the suicide gene thymidine Kinase for a broad application in cancer gene therapy

Treatment of cancer using gene therapy is based on adding a property to the cell leading to its elimination. One possibility is the use of suicide genes that code for enzymes that transform a pro-drug into a cytotoxic product. The most extensively used is the herpes simplex virus thymidine kinase (TK) gene, followed by administration of the antiviral drug ganciclovir (GCV). The choice of the promoter to drive the transcription of a transgene is one of the determinants of a given transfer vector usefulness, as different promoters show different efficiencies depending on the target cell type. In the experiments presented here, we report the construction of a recombinant adenovirus carrying TK gene (Ad-TK) driven by three strong promoters (P CMV IE, SV40 and EN1) and its effectiveness in two cell types. Human HeLa and mouse CCR2 tumor cells were transduced with Ad-TK and efficiently killed after addition of GCV. We could detect two sizes of transcripts of TK gene, one derived from the close together P CMV IE/SV40 promoters and the other from the 1.5 Kb downstream EN1 promoter. The relative amounts of these transcripts were different in each cell type thus indicating a higher flexibility of this system

DNA repair-related genes in sugarcane expressed sequence tags (ESTs)

A identificaçäo e caracterizaçäo de genes envolvidos com reparo de DNA säo de grande interesse, dada a sua importância na manutençäo da integridade genômica. Além disso, a alta conservaçäo dos genes de reparo de DNA faz com que possam ser utilizados como fonte de informaçäo no que diz respeito à origem e evoluçäo das espécies. Os mecanismos relacionados à remoçäo de danos pelo reparo de DNA, bem como suas conseqüências biológicas, já säo bem conhecidas em bactérias, leveduras e animais. Entretanto, no que diz respeito a organismos vegetais, ainda há muito a ser investigado. No presente trabalho, apresentamos a identificaçäo dos genes envolvidos nas principais vias de reparo de DNA em cana-de-açúcar, através de uma análise de similaridade do banco de dados do projeto brasileiro Sugarcane Expressed Sequence Tag (SUCEST) com seqüências protéicas conhecidas disponíveis em outros bancos de dados públicos (National Center of Biotechnology Information (NCBI) e Munich Information Center for Protein Sequences (MIPS) Arabidopsis thaliana). Esta busca revelou que a gama de proteínas envolvidas no reparo de DNA em cana-de-açúcar é similar a de outros eucariotos. Mesmo assim, foi possível identificar algumas características interessantes encontradas apenas em vegetais, provavelmente em funçäo do seu processo evolutivo independente. As vias de reparo do DNA aqui representadas incluem fotorreativaçäo, reparo excisäo de bases, reparo excisäo de nucleotídeos, reparo mismatch, end-joinning näo homólogo, reparo por recombinaçäo homóloga e tolerância a lesões. Este trabalho descreve as principais diferenças encontradas na maquinaria de reparo de DNA de células vegetais em relaçäo àquela de organismos nos quais encontra-se bem descrita. Tais diferenças chamam a atençäo para um potencial de mecanismos distintos em vegetais, que merecem futuras investigações.

Distribution of DNA repair-related ESTs in sugarcane

As vias de reparo de DNA säo requeridas para manter a necessária estabilidade genômica e garantir a sobrevivência do organismo, frente aos efeitos deletérios causados por fatores endógenos e exógenos. Neste trabalho, realizamos a análise dos padrões de expressäo dos genes de reparo de DNA encontrados na cana-de-açúcar, pela determinaçäo da distribuiçäo de ESTs nas diferentes bibliotecas de cDNA no projeto de transcriptoma SUCEST. Três vias de reparo - fotorreativaçäo, reparo por excisäo de bases e reparo por excisäo de nucleotídeos - foram estudadas através do uso de proteínas de reparo como sondas para identificaçäo de ESTs homólogos em cana-de-açúcar, com base na procura computacional de similaridade. Os resultados indicam que os genes de reparo de DNA possuem uma expressäo diferencial nos tecidos, dependendo da via de reparo analisada. Esses dados in silico fornecem importantes indícios da expressäo diferencial, a qual deve ser confirmada por análises bioquímicas diretas.